描述：【產(chǎn)品名稱(chēng)】小反芻獸疫病毒PCR試劑盒 【包裝規格】50T/盒 【產(chǎn)品方法】實(shí)時(shí)熒光PCR法 【預期用途】 適用于小反芻獸疫病毒檢測，可用于臨床小反芻獸疫病毒感染的輔助診斷，但不作確診使用。 【檢驗原理】 小反芻獸疫病毒檢測試劑盒針對小反芻獸疫病毒的高度保守區域設計特異性引物和探針，在反應體系中含小反芻獸疫病毒基因組模板的情況下，PCR反應得以進(jìn)行并釋放熒光信號。利用熒
【產(chǎn)品名稱(chēng)】小反芻獸疫病毒PCR試劑盒
【包裝規格】 50T/盒
【產(chǎn)品方法】實(shí)時(shí)熒光PCR法
【預期用途】
適用于小反芻獸疫病毒檢測，可用于臨床小反芻獸疫病毒感染的輔助診斷，但不作確診使用。
【小反芻獸疫病毒PCR試劑盒檢驗原理】
小反芻獸疫病毒檢測試劑盒針對小反芻獸疫病毒的高度保守區域設計特異性引物和探針，在反應體系中含小反芻獸疫病毒基因組模板的情況下，PCR反應得以進(jìn)行并釋放熒光信號。利用熒光定量PCR儀對PCR過(guò)程中相應通道信號進(jìn)行實(shí)時(shí)監測和輸出，實(shí)現檢測結果的定性分析。
【主要組成成份】
RT-PCR反應液、混合酶液、陽(yáng)性對照、陰性對照。
【儲存條件及有效期】
避光-20℃以下保存，避免反復凍融，有效期為12個(gè)月。
【適用儀器】
ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列 、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。
【檢驗方法】
試劑準備（試劑準備區）
（1）從冰箱中取出試劑盒, 從試劑盒中取出實(shí)驗所需試劑，充分融化混勻并瞬時(shí)離心以去除管壁附著(zhù)液體。
（2）核算當次實(shí)驗所需要的反應數（n），并根據如下表所示反應體系計算當次實(shí)驗所需要的各種試劑量。
n =陰性對照數（1T）+陽(yáng)性對照數（1T）+誤差預留量（1T）+樣本數
單反液配制表(每份) | PCR反應液（UNG酶及Taq酶） | 20 μL |
（3）在無(wú)菌離心管中加入上述試劑，充分混勻后瞬時(shí)離心。按照20 μL/管分裝量將試劑分裝至PCR反應管。
（4）蓋緊PCR反應管蓋后將PCR反應管轉移至樣本處理區。剩余試劑放回-20℃以下冰箱冷凍保存。
2.樣本準備（樣本處理區）
用QIAGEN、Roche公司DNA提qu試劑盒提取DNA，具體操作按照其試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。
3.加樣
在上述制備好的PCR反應樣本管中分別加入處理好的待測標本DNA各5μl、終體積25μl/管，蓋好PCR反應蓋混勻后瞬時(shí)低速離心，轉移到PCR儀器上。陰性對照和陽(yáng)性對照管則各加5μL試劑盒自帶的陰性對照或陽(yáng)性對照品，終體積為25μl/管，蓋好PCR反應蓋混勻后瞬時(shí)低速離心，轉移到PCR儀器上。
PCR（PCR擴增區）
反應體積 | 25 μL | 通道選擇 | FAM通道采集LSDV熒光信號 |
PCR 反應 條件 | 步驟 | 條件 | 循環(huán)數 |
UNG處理 | 37℃：2分鐘（min） | 1 | |
預變性 | 95℃：3分鐘（min） | 1 | |
PCR擴增 | 95℃：5秒（s） | 40 | |
58℃：40秒（s） （此階段結束時(shí)采集熒光信號） |
（1）取樣本處理區準備好的PCR反應管，放置在實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀樣品槽相應位置，并記錄放置順序。
（2）按下表設置儀器核酸擴增相關(guān)參數進(jìn)行PCR擴增。
注：ABI系列熒光PCR儀在設置時(shí)不選ROX校正，設置淬滅基團選擇None。
【參考值（參考范圍）】
1.試劑盒有效性判定：
（1）陽(yáng)性對照：有典型S型擴增曲線(xiàn)或Ct值≤35。
（2）陰性對照：Ct值＞38或無(wú)Ct值，線(xiàn)形為直線(xiàn)或輕微斜線(xiàn)，無(wú)指數增長(cháng)期。
2.標本結果判定：
（1）陽(yáng)性：標本檢測結果Ct值≤35或有明顯指數增長(cháng)期。
（2）可疑：標本檢測結果Ct值在35～38范圍內。此時(shí)應對標本進(jìn)行重復檢測，如重復實(shí)驗結果Ct值仍在35～38范圍內，有明顯指數增長(cháng)期，則判定為陽(yáng)性，否則為陰性。
（3）陰性：標本檢測結果Ct值＞38或無(wú)Ct值。
【檢驗方法的局限性】
當檢測樣本中被檢核酸濃度含量低于本試劑盒的最di檢出限shi可能會(huì )發(fā)生假陰性的結果。
本試劑盒僅供標本初步篩查使用，對于本試劑盒檢測陽(yáng)性結果應進(jìn)一步使用培養法進(jìn)行確診。
【注意事項】
使用本試劑盒的實(shí)驗室，應嚴格按照國家有關(guān)部分頒布的有關(guān)基因擴增檢驗實(shí)驗室管理規范進(jìn)行管理；
為避免RNA降解，樣本處理過(guò)程應在0-4℃條件下操作，且完成實(shí)驗后立即上機檢測；樣本處理過(guò)程中使用的器具耗材應經(jīng)過(guò)無(wú)核酶處理；
各區域物品均為專(zhuān)用，不得交叉使用，以免污染；檢測結束后，應立即對工作臺清潔；
吸取反應液時(shí)，應盡量避免產(chǎn)生氣泡；上 PCR 儀前，應注意檢查各反應管是否蓋緊，以免液體蒸發(fā)造成結果不準確；
試劑盒所有試劑在使用前應該在常溫下充分融化混勻，并應瞬時(shí)離心；
試劑盒內所配陰性和陽(yáng)性對照在第一次使用前應全部轉移至標本準備區，并單獨存放；
為防止熒光干擾，應避免裸手直接接觸PCR反應管，并應避免在PCR反應管上進(jìn)行任何標記；
檢測過(guò)程中使用過(guò)的吸頭，應直接打到盛有 10%次氯酸的廢物缸內，檢測結束的PCR 反應管，切忌開(kāi)蓋，并與其他廢棄物品一同滅菌后丟棄；工作臺及各種實(shí)驗用品應定期用 10%次氯酸、75%酒精或紫外燈進(jìn)行消毒；
9.儀器擴增相關(guān)參數應按照本說(shuō)明書(shū)相關(guān)要求進(jìn)行設置；不同批號試劑不能混用；并在有效期內使用。
