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禽傳染性支氣管炎病毒檢測試劑盒

描述：禽傳染性支氣管炎病毒檢測試劑盒適用于禽支氣管炎病毒檢測，可用于臨床禽支氣管炎病毒感染的輔助診斷，但不作確診使用。

更新時(shí)間：2024-07-04
產(chǎn)品型號：50T
廠(chǎng)商性質(zhì)：生產(chǎn)廠(chǎng)家
詳情介紹
　　一、禽傳染性 支氣管炎病毒檢測試劑盒
　　二、通用名稱(chēng)：禽傳染性支氣管炎病毒檢測試劑盒（實(shí)時(shí)熒光PCR法）
　　三、包裝規格 50T/盒
　　四、預期用途：
　　適用于禽支氣管炎病毒檢測，可用于臨床禽支氣管炎病毒感染的輔助診斷，但不作確診使用。
　　五、禽傳染性支氣管炎病毒檢測試劑盒原理：
　　針對禽支氣管炎病毒基因組高度保守區域設計特異性引物和探針，在反應體系中含禽支氣管炎基因組模板的情況下，PCR反應得以進(jìn)行并釋放熒光信號。利用熒光定量PCR儀對PCR過(guò)程中相應通道信號進(jìn)行實(shí)時(shí)監測和輸出，實(shí)現檢測結果的定性分析。
 
檢驗方法
1. 試劑準備（試劑準備區）
（1）從冰箱中取出試劑盒, 從試劑盒中取出實(shí)驗所需試劑,充分融化混勻并瞬時(shí)離心以去除管壁附著(zhù)液體。
（2）核算當次實(shí)驗所需要的反應數（n），并根據如下表所示反應體系計算當次實(shí)驗所需要的各種試劑量。
n =陰性對照數（1T）+陽(yáng)性對照數（1T）+誤差預留量（1T）+樣本數
單反液配制表(每份)
RT-PCR反應液
15.0 μL
逆轉錄酶
 2.0 μL
Taq酶
 3.0 μL
 (3)在無(wú)菌離心管中加入上述試劑，充分混勻后瞬時(shí)離心。按照20 μL/管分裝量將試劑分裝至PCR反應管。
2.樣本準備（樣本處理區）
用QIAGEN、Roche公司RNA提取試劑盒提取RNA，具體操作按照其試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。
3.加樣
 在上述制備好的PCR反應樣本管中分別加入處理好的待測標本RNA各5 μl、終體積25 μl/管，蓋好PCR反應蓋混勻后瞬時(shí)低速離心，轉移到PCR儀器上。陰性對照和陽(yáng)性對照管則各加5 μL試劑盒自帶的陰性對照或陽(yáng)性對照品，終體積為25 μl/管，蓋好PCR反應蓋混勻后瞬時(shí)低速離心，轉移到PCR儀器上。
4. PCR（PCR擴增區）
（1）取樣本處理區準備好的PCR反應管，放置在實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀樣品槽相應位置，并記錄放置順序。
（2）按下表設置儀器核酸擴增相關(guān)參數進(jìn)行PCR擴增。

反應體積
25 μL
通道選擇
FAM通道采集禽白血病病毒熒光信號
PCR
反應
條件
步驟
條件
循環(huán)數
反轉錄
    42℃：10分鐘（min）
1
預變性
95℃：3分鐘（min）
1
預擴增
95℃：5秒（s）
5
55℃：40秒（s）
PCR擴增
95℃：5秒（s）
40
55℃：40秒（s）
（此階段結束時(shí)采集熒光信號）
 
注：ABI系列熒光PCR儀在設置時(shí)不選ROX校正，設置淬滅基團選擇       None。

   【參考值（參考范圍）】
1.試劑盒有效性判定：
（1）陽(yáng)性對照：有典型S型擴增曲線(xiàn)或Ct值≤35。
（2）陰性對照：Ct值＞38或無(wú)Ct值，線(xiàn)形為直線(xiàn)或輕微斜線(xiàn)，無(wú)指數增長(cháng)期。
2.標本結果判定：
（1）陽(yáng)性：標本檢測結果Ct值≤35或有明顯指數增長(cháng)期。
（2）可疑：標本檢測結果Ct值在35～38范圍內。此時(shí)應對標本進(jìn)行重復檢測，如重復實(shí)驗結果Ct值仍在35～38范圍內，有明顯指數增長(cháng)期，則判定為陽(yáng)性，否則為陰性。
（3）陰性：標本檢測結果Ct值＞38或無(wú)Ct值。

【檢驗結果的解釋】
通道及檢測結果
標本檢測結果解釋
FAM
+
標本中檢出禽白血病病毒RNA
-
標本中未檢出禽白血病病毒 RNA

【檢驗方法的局限性】
1. 當檢測樣本中被檢核酸濃度低于本試劑盒的檢出限shi可能會(huì )發(fā)生假陰性的結果。
2. 被檢樣本在采集、運輸、儲存以及處理過(guò)程中操作方式不當容易造成RNA降解而產(chǎn)生假陰性結果。
3. 樣本在采集、運輸、儲存以及處理過(guò)程中發(fā)生交叉污染，則容易得到假陽(yáng)性結果。

【產(chǎn)品性能指標】 
產(chǎn)品的檢出限為102 Copies/mL，產(chǎn)品CV值≤5%。
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