昆蟲(chóng)ELISA試劑盒使用流程： 1.標準品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑藴势芬恢В脩?hù)可按照下列方式在小試管中進(jìn)行稀釋。
400ng/L5號標準品150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
200ng/L4號標準品150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
100ng/L3號標準品150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
50ng/L2號標準品150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
25ng/L1號標準品150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
8.洗滌：揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.
10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時(shí)藍色立轉黃色）。
11.測定：以空白空調零，450nm波長(cháng)依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘以?xún)冗M(jìn)行。
12.計算：以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線(xiàn)，根據樣品的OD值由標準曲線(xiàn)查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線(xiàn)的直線(xiàn)回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實(shí)際濃度。
