魚(yú)ELISA試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中魚(yú)皮質(zhì)醇水平。用純化的魚(yú)皮質(zhì)醇抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入皮質(zhì)醇，再與HRP標記的皮質(zhì)醇抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的皮質(zhì)醇呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長(cháng)下測定吸光度（OD值），通過(guò)標準曲線(xiàn)計算樣品中魚(yú)皮質(zhì)醇濃度。 魚(yú)ELISA試劑盒實(shí)驗規則介紹：
1、要保證移液槍的準確性，誤差不能超過(guò)2%。可用水和電子天平進(jìn)行確定。但有專(zhuān)業(yè)人員進(jìn)行矯正。
2、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的液體后，要更換槍頭。即使是吸取標準品時(shí)。
3、要在實(shí)驗前1小時(shí)將試劑盒從冰箱中取出，使各種試劑都恢復到室溫，以使結果更穩定。
4、實(shí)驗時(shí)，要使底物避光保存。
5、用槍吸取液體時(shí)速度不能太快，以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準確。
6、吸取液體時(shí)，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。
7、將液體加到酶標孔中時(shí)，避免槍頭和孔內液體接觸，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸，液滴會(huì )自然流下去。
8、液體全部加完后，可將酶標板在桌子上平行輕輕晃動(dòng)30秒，混勻液體。也可以用酶標儀的晃動(dòng)功能。
9、溫浴時(shí)，要用不干膠或膠帶紙封好酶標板，防止水分的蒸發(fā)。
10、洗板時(shí)，每次洗液加入后，應靜置1分鐘，使清洗更加*。沒(méi)有洗板機時(shí)，倒去液體后，要將酶標板在報紙或毛紙上用力拍干。
